（1）平板上有過多的水分；

（2）劃線時接種環未經反復灼燒。

（3）多區劃線，三區或四區劃線，越是稀釋到4區，間距要越寬。

（1）滅菌溫度要嚴格控制，按照要求滅菌，尤其含糖量較高的培養基溫度不應太高，過高會導致糖分焦化，影響質量。

（2）瓊脂培養基不能反復溶化。反復溶化會破壞培養基中的營養成分。

（3）培養基不能反復滅菌，反復滅菌也會導致營養成分的破壞。

（4）含瓊脂的培養基滅菌后，要搖勻。

（5）分裝培養基前要使培養基完全溶解。

（1）平板：大多數平板如VRBA、DC、尿素酶生化管、顯色系列等要避光低溫保存。

（2）干粉培養基：避光干燥，結塊后不能使用。

（3）亞碲酸鉀卵黃增菌液、50%卵黃乳液等：冷凍保存，使用時，要常溫解凍，避免水浴加熱。

（4）抗生素類：冷藏保存，溫度過高會導致靈敏度的下降。

（5）兔血漿：冷藏保存少量的紅色不會影響結果。

按SN、GB等標準或培養基的使用說明所述時間進行觀察，時間過短或時間過長，單菌落的特征都不會很明顯。如單增李斯特氏菌顯色培養基，時間短單菌落看不到卵磷脂環，時間長綿羊李氏菌也會產生沉淀環。OXA、PALCAM的觀察也如此，時間過長，李氏菌使整個平板成黑色，不利于觀察單個菌落。霉菌要3天后要及時觀察計數，防止時間長成一片。

（1）溫度的掌握:卵黃和抗生素類添加的溫度都不應太高。

（2）定量: 過多會抑制一些目標菌，太少又導致雜菌的過度生長。

（1）真菌類：25-28℃培養

（2）細菌類：李氏菌在增菌和生化中要求培養溫度在30℃左右。

（3）其他一般在36℃左右

穿刺接種、傾注接種、涂布接種、劃線接種。